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2:3. dissipation du potentiel de membrane mitochondriale, respiration et fonction contractile
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4-la mitochondrie est un élément essentiel de la production d énergie de la cellule cardiaque. dans le muscle cardiaque, plus de 30 % du volume cellulaire est occupé par les mitochondries. grâce au maintien de la phosphorylation oxydative, les mitochondries assurent un perpétuel renouvellement en atp nécessaire aux phénomčnes de contraction-relaxation des cardiomyocytes. la production d atp est conditionnée par l activité de l atp synthase ou fof1-atpase, elle-męme déterminée par la présence d une force protomotrice générant une différence de potentiel.
5:nous avons montré que les mitochondries isolées de coeurs de rats traités par le lps présentent des anomalies caractérisées par une augmentation de perméabilité, une diminution du potentiel de membrane et une fuite de facteurs pro-apoptotiques, comme le cytochrome c (fauvel et al., 2002). la présence cytosolique de cytochrome c conduit ŕ l activation de la caspase-9, elle-męme responsable du clivage et de l activation de la caspase-3. l inhibition pharmacologique de la transition de perméabilité mitochondriale par la cyclosporine permet de prévenir l ensemble de ces phénomčnes et améliore la fonction myocardique. ces résultats sont en accord, montrant que la production de tnf-a myocardique conduit ŕ une diminution du potentiel de membrane mitochondrial des cardiomyocytes (favory et al., 2004).
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10:nous testons actuellement dans le laboratoire l hypothčse selon laquelle la dissipation du potentiel de membrane mitochondrial des cardiomyocytes est un évčnement majeur induit par le lps qui, en plus de fuite mitochondriale de facteurs pro-apoptotiques comme le cytochrome c, est responsable de la défaillance myocardique septique.
11:nous réaliserons des expériences montrant que la dissipation du potentiel de membrane mitochondrial des cardiomyocytes est responsable d anomalies mitochondriales qui associent une augmentation de perméabilité, un découplage de la chaîne respiratoire, une augmentation de la production de radicaux libres de l oxygčne et des anomalies de l homéostasie calcique.
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13:a) dans un modčle de péritonite chez la souris, nous étudierons d abord les effets du sepsis sur le potentiel de membrane mitochondrial des cellules cardiaques. la réduction attendue du potentiel de membrane sera associée ŕ des modifications de la respiration mitochondriale qui sera évaluée grâce ŕ un oxygraphe polarographique haute résolution. l ensemble des résultats obtenus permettra de confirmer que la mitochondrie représente une cible importante modulant la réponse ŕ une agression septique.
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17-c) une étude fonctionnelle sur cardiomyocytes isolés permettra de montrer le bénéfice fonctionnel de l inhibition de la dissipation du potentiel mitochondrial par l utilisation de la cyclosporine et de dérivé non immunosuppresseur, le n-methyl-4-isoleucine csa (nim 811).
18:en effet, dans ce contexte, un traitement par la cyclosporine et le nim 811 administrés immédiatement aprčs l induction de la péritonite chez la souris prévient la baisse de potentiel de membrane mitochondrial et la libération de cytochrome c.
19:le rôle de bcl-2, une protéine mitochondriale qui peut dans certaines conditions s opposer ŕ la baisse de potentiel de membrane mitochondrial et la libération de cytochrome c, sera évalué grâce ŕ l utilisation de souris transgéniques.
20:nous confirmerons l hypothčse que la sur-expression de la protéine anti apoptotique bcl-2 chez la souris transgénique bcl-2 /22 permet de prévenir la baisse de potentiel de membrane mitochondrial, les anomalies contractiles cardiaques et de réduire la mortalité induite par la péritonite.
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30: le potentiel de membrane mitochondrial sera évalué par l utilisation de tmre, un fluorophore cationique de localisation mitochondriale. la baisse de la fluorescence obtenue avec le tmre témoigne de la baisse de potentiel de membrane mitochondrial ( m)
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